細(xì)菌特殊染色方法(細(xì)菌染色方法)
1.細(xì)菌有哪些染色方法
一、常用的染色方法有革蘭氏染色（最基本）、芽孢染色、莢膜染色、鞭毛染色等。
二、.1 革蘭染色法 （1）取含金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的混合菌液涂片、干燥、固定；（2）染色：用結(jié)晶紫染液染1min，水沖洗；盧戈碘液染1min，水沖洗；0.4%復(fù)紅酒精溶液染30s，水沖洗；（3）吸干后鏡檢[2] 。
1.2 抗酸染色法 （1）取結(jié)核桿菌陽性的痰標(biāo)本（已處理）涂片、干燥、固定。（2）染色：將石炭酸復(fù)紅染液沸水浴10min，滴加2~3滴覆蓋菌膜染色 5min，水沖洗，3%鹽酸酒精脫色30s，水沖洗；堿性美蘭復(fù)染30s，水沖洗。（3）吸干后鏡檢[3] 。
1.3 莢膜染色法 （1）取接種肺炎球菌死亡的小鼠腹腔液涂片、干燥、固定；（2）染色：用石炭酸復(fù)紅染液染1min，水沖洗；95%酒精脫色5s水沖洗；20%鞣酸溶液媒染10min水沖洗；0.8%孔雀綠溶液染色1min，水沖洗；（3）吸干后鏡檢[4] 。
1.4 芽胞染色法 （1）取等量破傷風(fēng)桿菌厭氧培養(yǎng)菌液和5%孔雀綠水溶液，放入小試管中充分混合，沸水浴20min；取上述混合液涂片、干燥、固定；（2）用 1%沙黃液復(fù)染10min，水沖洗；（3）干后鏡檢。
2.1 革蘭染色 鏡下，金黃色葡萄球菌染成紫色、球形，為革蘭陽性菌；大腸埃希菌染成紅色、桿狀，為革蘭陰性菌。革蘭染色法是細(xì)菌學(xué)中最經(jīng)典，應(yīng)用最廣泛的染色法之一。脫色是影響革蘭染色的關(guān)鍵步驟，脫色時(shí)間長短直接關(guān)系到染色結(jié)果的準(zhǔn)確性[5] 。脫色過度則革蘭陽性菌可能被誤染為革蘭陰性菌，脫色不 夠則革蘭陰性菌可能被誤染為革蘭陽性菌，為此學(xué)生難以把握。現(xiàn)將原有四步染色法改為三步法，即把第三步酒精脫色和第四步復(fù)紅復(fù)染合并一步進(jìn)行，使用 0.4%復(fù)紅酒精溶液作為復(fù)染劑，可達(dá)到脫色和復(fù)染雙重目的。這樣，就可以避免學(xué)生在四步法中因脫色時(shí)間不易掌握而造成染色的失敗，減少重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，提高了教學(xué)效果。
2.2 抗酸染色 鏡下，結(jié)核分枝桿菌染成紅色，為抗酸菌；背景和其他菌被染成藍(lán)色，為非抗酸菌。傳統(tǒng)的方法是滴加石炭酸復(fù)紅染液于涂片上，用玻片夾夾住涂片以微火煙葉熱，保持染液冒蒸汽約5min，此法學(xué)生容易使染液蒸干或使染液沸騰，從而影響染色效果和污染環(huán)境。改良后的方法是將染液直接加熱改為水浴后使用，克服上述的缺點(diǎn)，且染色效果良好。適合實(shí)驗(yàn)教學(xué)使用。
2.3 莢膜染色 鏡下，肺炎球菌菌體染成紅色（成雙排列），莢膜染成綠色，存在于菌體的周圍。傳統(tǒng)的莢膜染色是用結(jié)晶紫染液染色，菌體染成紫色，莢膜染成淡紫色或無色，菌體和莢膜之間反差小，不易分辨。改良后，增加了脫色、媒染、復(fù)染的步驟，使菌體和莢膜之間反差增大，易于觀察，可用于學(xué)生實(shí)驗(yàn)和示教片的制作。
2.4 芽胞染色 鏡下，破傷風(fēng)桿菌的菌體染成紅色，芽胞染成綠色。傳統(tǒng)的方法是滴加石炭酸復(fù)紅染液于涂片上并弱火加熱，使染液冒蒸汽約5min，此法染液用量大，且容易污染衣物和實(shí)驗(yàn)臺(tái)。現(xiàn)改為菌液和染液混合水浴加熱初染，然后制備涂片、固定、復(fù)染，即節(jié)約時(shí)間，染液消耗又少，且菌體、芽胞對(duì)比鮮明。此法適用于教學(xué)標(biāo)本片的制作。
三、簡單染色法是利用單一染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色的一種方法。
操作步驟
1.涂片：用灼燒滅菌冷卻后的接種環(huán)挑取少量菌體與水滴充分混勻，涂成極薄的菌膜。
2.干燥：可自然晾干，或?qū)⑼科糜诨鹧娓咛幬岷娓?，但不能直接在火焰上烘烤?/p>
3.固定：手執(zhí)玻片一端，有菌膜的一面朝上，通過迅速通過火焰2-3次（用手指觸涂片反面，以不燙手為宜）。
4.染色：加適量（以蓋滿菌膜為度）結(jié)晶紫染色液（或石炭酸復(fù)紅液），染l~2min。
5.水洗：用自來沖洗至流下的水中無染色液的顏色時(shí)為止。
6.干燥
7.鏡檢
2.細(xì)菌染色方法有哪些
1 革蘭氏染色法 是最常用的鑒別染色法之一。此法起始1881年，染色步驟是先用結(jié)晶紫或龍膽紫染液加于已固定好的標(biāo)本上使之著色，其后加碘液作媒染劑，再用酒精脫色，最后用復(fù)紅或沙黃復(fù)染。革蘭氏染色的結(jié)果與培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)條件及操作技術(shù)等有密切關(guān)系。如涂片太厚影響酒精脫色，革蘭氏陰性菌則可染成革蘭氏陽性菌。脫色時(shí)若酒精作用時(shí)間太長， ，莢膜不著色，包繞在菌體周圍，成為一層透明的空圈。 5 熒光染色法 用熒光染料，如金胺、吖啶橙等進(jìn)行染色。細(xì)菌用熒光染料著色后在熒光顯微鏡下檢查，可在黑的背景中觀察到細(xì)菌發(fā)出明亮的熒光。用熒光染色法檢查細(xì)菌，有加快檢查速度和提高陽性率等優(yōu)點(diǎn)。
3.給細(xì)菌染色的方法都有幾種,怎么操作,都用復(fù)紅染色
給細(xì)菌染色的方法都有幾種，怎么操作，都用復(fù)紅染色
簡單染色法：利用單一染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色的一種方法.例如番紅.
1.涂片：用灼燒滅菌冷卻后的接種環(huán)挑取少量菌體與水滴充分混勻，涂成極薄的菌膜.
2.干燥：可自然晾干，或?qū)⑼科糜诨鹧娓咛幬岷娓?，但不能直接在火焰上烘?
3.固定：手執(zhí)玻片一端，有菌膜的一面朝上，通過迅速通過火焰2-3次（用手指觸涂片反面，以不燙手為宜）.
4.染色：加適量（以蓋滿菌膜為度）結(jié)晶紫染色液（或石炭酸復(fù)紅液），染l~2min.
5.水洗：用自來沖洗至流下的水中無染色液的顏色時(shí)為止.
6.干燥
7.鏡檢
復(fù)染色：利用用兩種以上染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色.例如革蘭氏染色法.
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，需要堿性染料（basic dye）初染液；媒染劑（mordant）；脫色劑（decolorising agent）和復(fù)染液（counterstain）.
堿性染料初染液的象在細(xì)菌的單染色法基本原理中所述的那樣，而用于革蘭氏染色的初染液一般是結(jié)晶紫（crystal violet）.媒染劑的作用是增加染料和細(xì)胞之間的親和性或附著力，即以某種方式幫助染料固定在細(xì)胞上，使不易脫落，碘（iodine ）是常用的媒染劑.脫色劑是將被染色的細(xì)胞進(jìn)行脫色，不同類型的細(xì)胞脫色反應(yīng)不同，有的能被脫色，有的則不能，脫色劑常用95%的酒精（ethanol）.復(fù)染液也是一種堿性染料，其顏色不同于初染液，復(fù)染的目的是使被脫色的細(xì)胞染上不同于初染液的顏色，而未被脫色的細(xì)胞仍然保持初染的顏色，而且將細(xì)胞區(qū)分成G+和G-兩大類群，常用的復(fù)染液為番紅.
1.載玻片固定.在無菌操作條件下，用接種環(huán)挑取少量細(xì)菌于干凈的載玻片上涂布均勻，在火焰上加熱以殺死菌種并使其粘附固定.
2.草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘.
3.自來水沖洗，去掉浮色.
4.用碘-碘化鉀溶液媒染1分鐘，傾去多余溶液.
5.用中性脫色劑如乙醇（95%）或丙酮酸脫色30秒，革蘭氏陽性菌不被褪色而呈紫色，革蘭氏陰性菌被褪色而呈無色.
6.用番紅染液或者沙黃復(fù)染30秒，革蘭氏陽性菌仍呈紫色，革蘭氏陰性菌則呈現(xiàn)紅色.
4.給細(xì)菌染色的方法都有幾種,怎么操作,都用復(fù)紅染色嗎
常用的細(xì)菌染色方法有簡單染色和革蘭氏染色。1、簡單染色是利用單一染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色，常用堿性染料如美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等。方法很簡單：（一）制片：進(jìn)行無菌涂片->；自然風(fēng)干->；微火固定 （二）染色：例如用美藍(lán)染色3-5分鐘，濾紙吸干后就可以置于顯微鏡下觀察了
2、革蘭氏染色：使用非常普遍。方法：（1）用堿性染料結(jié)晶紫對(duì)菌液涂片進(jìn)行初染（2）用碘液進(jìn)行媒染（3）用乙醇沖洗以脫色（4）用一種與結(jié)晶紫不同顏色的堿性染料進(jìn)行復(fù)染如沙黃。
這些實(shí)驗(yàn)都很簡單，到時(shí)候你親自做一遍就會(huì)很明白了，你現(xiàn)在只需弄清原理和簡單過程就行。
5.細(xì)菌細(xì)胞染色的方式有哪幾種,各有什么優(yōu)缺點(diǎn)
質(zhì)粒是細(xì)菌染色體外的遺傳物質(zhì)，多為環(huán)狀雙螺旋DNA分子。
質(zhì)?？梢宰陨韽?fù)制，質(zhì)粒是自行復(fù)制單位，有的需與核質(zhì)染色體的復(fù)制同步，稱為嚴(yán)緊型復(fù)制（stringent replication）。 質(zhì)粒編碼細(xì)菌各種重要的生物學(xué)性狀。
編碼性菌毛的質(zhì)粒稱致育質(zhì)?；騀質(zhì)粒（fertility plasmid），具有F質(zhì)粒的細(xì)菌有性菌毛。編碼細(xì)菌各種毒力因子的質(zhì)粒統(tǒng)稱毒力質(zhì)?；颌鲑|(zhì)粒（virulence plasmid），如致病性大腸桿菌在黏膜上定居及產(chǎn)生毒素的能力可由不同質(zhì)粒編碼，其中K質(zhì)粒編碼對(duì)黏膜具有黏附活性的菌毛，ST質(zhì)粒與LT質(zhì)粒分別編碼耐熱腸毒素和不耐熱腸毒素。
細(xì)菌對(duì)抗菌藥物或重金屬鹽類的抗性則由R質(zhì)粒（resistance plasmid）所決定。一個(gè)質(zhì)?？赏瑫r(shí)具有幾種編碼功能。
有的質(zhì)粒還可以結(jié)合到染色體上，如F質(zhì)粒在變形桿菌內(nèi)是獨(dú)立存在的，但在大腸桿菌內(nèi)則可與染色體結(jié)合，這種質(zhì)粒稱為附加體（episome）。 轉(zhuǎn)座因子 （transposable element）近年來發(fā)現(xiàn)微生物的某些DNA片段作為一個(gè)獨(dú)立單位可在染色體上移動(dòng)，此種移動(dòng)甚至可發(fā)生在不同種細(xì)胞之間。
這種可移動(dòng)的DNA片段稱之為轉(zhuǎn)座因子。細(xì)菌的轉(zhuǎn)座因子有三種類型：插入序列（insert sequence,IS）、轉(zhuǎn)座子（transposon,Tn）以及某些特殊的噬菌體。
毒力島 （pathogen。質(zhì)粒是細(xì)菌染色體外的遺傳物質(zhì)，多為環(huán)狀雙螺旋DNA分子。
質(zhì)粒可以自身復(fù)制，質(zhì)粒是自行復(fù)制單位，有的需與核質(zhì)染色體的復(fù)制同步，稱為嚴(yán)緊型復(fù)制（stringent replication）。 質(zhì)粒編碼細(xì)菌各種重要的生物學(xué)性狀。
編碼性菌毛的質(zhì)粒稱致育質(zhì)?；騀質(zhì)粒（fertility plasmid），具有F質(zhì)粒的細(xì)菌有性菌毛。編碼細(xì)菌各種毒力因子的質(zhì)粒統(tǒng)稱毒力質(zhì)粒或Ⅵ質(zhì)粒（virulence plasmid），如致病性大腸桿菌在黏膜上定居及產(chǎn)生毒素的能力可由不同質(zhì)粒編碼，其中K質(zhì)粒編碼對(duì)黏膜具有黏附活性的菌毛，ST質(zhì)粒與LT質(zhì)粒分別編碼耐熱腸毒素和不耐熱腸毒素。
細(xì)菌對(duì)抗菌藥物或重金屬鹽類的抗性則由R質(zhì)粒（resistance plasmid）所決定。一個(gè)質(zhì)粒可同時(shí)具有幾種編碼功能。
有的質(zhì)粒還可以結(jié)合到染色體上，如F質(zhì)粒在變形桿菌內(nèi)是獨(dú)立存在的，但在大腸桿菌內(nèi)則可與染色體結(jié)合，這種質(zhì)粒稱為附加體（episome）。 轉(zhuǎn)座因子 （transposable element）近年來發(fā)現(xiàn)微生物的某些DNA片段作為一個(gè)獨(dú)立單位可在染色體上移動(dòng)，此種移動(dòng)甚至可發(fā)生在不同種細(xì)胞之間。
這種可移動(dòng)的DNA片段稱之為轉(zhuǎn)座因子。細(xì)菌的轉(zhuǎn)座因子有三種類型：插入序列（insert sequence,IS）、轉(zhuǎn)座子（transposon,Tn）以及某些特殊的噬菌體。
毒力島 （pathogenicity island,PAl）是20世紀(jì)90年代提出的一個(gè)新概念。PAI指病原菌的某個(gè)或某些毒力基因群，分子結(jié)構(gòu)與功能有別于細(xì)菌染色體，但位于細(xì)菌染色體之內(nèi)，因此稱之為‘島”。
PAI雖然是染色體的DNA片段，但兩端往往具有重復(fù)序列與插入元件，其G+C%及密碼使用與細(xì)菌染色體有明顯差異，分子量多為30~40kb，也有達(dá)100kb者。
