組織常用固定方法(組織和細(xì)胞的固定的方法)

1.組織和細(xì)胞的固定的方法有哪些

組織和細(xì)胞的固定的方法，浸潤(rùn)法

浸潤(rùn)法是組織化學(xué)和免疫

組織化學(xué)常用的固定方法，一次要處理許多組織樣品時(shí)也多用此法。

預(yù)先需估計(jì)固定劑的用量，并在取材前配好固定液，分裝于小容器內(nèi)，在容器上標(biāo)記組別和取材時(shí)間。容器內(nèi)放人記錄組織類型的紙條，以便包埋時(shí)辨認(rèn)。固定液的用量應(yīng)是樣品的40倍，以保證組織充分固定。固定時(shí)間可根據(jù)所選固定液和組織類型而定。

若進(jìn)行酶組織化學(xué)染色，應(yīng)在4℃短時(shí)間固定，固定時(shí)間長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致酶活性減弱，甚至消失。

可以到生物幫詳細(xì)的了解下，干細(xì)胞專用培養(yǎng)基

2.組織和細(xì)胞的固定用什么方法

灌流固定法

此法是經(jīng)血管途徑，將固定液灌注到欲固定的器官內(nèi)，使生活的細(xì)胞在原位及時(shí)迅速固定，取下組織之后再浸入相同的固定液內(nèi)繼續(xù)固定。

灌流固定時(shí)大動(dòng)物多采用輸液方式，將固定液從一側(cè)頸總動(dòng)脈或股動(dòng)脈輸入，從另一側(cè)切開靜脈放血，輸入固定液與放血同時(shí)進(jìn)行。固定液的輸人量因個(gè)體不同而異，即500―2000ml不等。

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3.最常用到的幾種組織固定液

(1)中性緩沖甲醛。

該液能夠固定大多數(shù)組織結(jié)構(gòu)，對(duì)脂類有較好的固定效果。免疫組化、原位雜交等試驗(yàn)都可以使用。

本液還可以長(zhǎng)時(shí)間存放，是實(shí)驗(yàn)室常備的固定液之一。固定液浸透較慢，固定時(shí)間不限，浸透之后可以長(zhǎng)時(shí)間存放（免疫組化和原位雜交標(biāo)本建議不要這么做）。

美中不足是染色時(shí)酸性染料著色不佳，并且本液對(duì)糖類沒有固定作用。 （2）AAF。

該液由醋酸（A）、酒精（A）和甲醛（F）為主要成分，廣泛用于動(dòng)植物組織的固定和各種實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，植物固定則是首選。固定液滲透均一，速度很快。

固定時(shí)間一般為4 ~ 24 h。此液處理后，染色結(jié)果細(xì)膩，但酸性染料著色力下降。

本液配制后可以短時(shí)間放置。 （3）Bouin。

過去常用的一種固定液，主要用于軟化皮膚或者富含結(jié)締組織的標(biāo)本，在胚胎標(biāo)本處理中使用很廣。用本液處理后，酸性染料著色鮮艷。

但是，由于含有苦味酸，不能用于原位雜交等實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。此外，本液對(duì)很多細(xì)胞器的破壞較大，尤其不適于固定腎臟標(biāo)本。

經(jīng)本液固定的標(biāo)本，尺寸應(yīng)盡可能小，否則內(nèi)外固定的效果有所差別。本液可以較長(zhǎng)時(shí)間存放，但標(biāo)本在其中不應(yīng)久存，固定8 ~ 24 h為宜。

（4）Zamboni。用于免疫組化和免疫電鏡的首選固定液。

保存細(xì)微結(jié)構(gòu)和抗原特性最好的固定液之一。固定液浸透速度較慢，要求標(biāo)本不能過大，常用于血管灌注。

該液可以長(zhǎng)時(shí)間存放，標(biāo)本在其中也可以保存較長(zhǎng)時(shí)間，抗原封閉作用相對(duì)較弱。由于含有苦味酸，故不用于原位雜交試驗(yàn)。

（5）Helly,Susa,Zenker。這是三種比較相近的固定液，含有汞鹽和重鉻酸鉀。

經(jīng)這類固定液處理，標(biāo)本對(duì)酸性和堿性染料均有較好的親和能力。染色處理前需要脫汞和脫碘操作。

目前除了幾種傳統(tǒng)染色更鮮艷外，并無(wú)其他優(yōu)勢(shì)。

4.固定有哪些方法

(1) 外固定：常用方法有小夾板固定或石膏繃帶固定。

①小夾板 固定：主要適用于四肢長(zhǎng)骨的較穩(wěn)定骨折，固定范圍不包括骨折處的上 下關(guān)節(jié)，利于早期功能鍛煉。但偶有固定不牢的可能，易使骨折移位、不愈合、畸形愈合，若捆扎過緊影響肢體血運(yùn)、發(fā)生遠(yuǎn)端缺血。

②石膏 繃帶固定：可按肢體形狀塑形，干固后固定可靠，固定范圍大，不易發(fā)生 再移位，但不利于功能鍛煉。 （2） 持續(xù)牽引固定：皮牽引和骨牽引。

骨牽引較直接且力量大，利 于開放性傷口觀察及換藥，利于功能鍛煉，但不能早期下床活動(dòng)；皮牽 引較間接且力量小，多應(yīng)用于兒童及股骨近端骨折的患者。 （3） 內(nèi)固定：復(fù)位準(zhǔn)確且固定牢靠但具有創(chuàng)傷。

內(nèi)固定器材有多 種，常用的有金屬絲、接骨板、螺絲釘、髓內(nèi)釘、加壓鋼板等。

5.幾種細(xì)胞固定方法

選擇最佳固定液標(biāo)準(zhǔn)是：

(1)最好地保持細(xì)胞和組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)；

(2)最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金屬的固定液在免疫組化和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)中是禁用的；

(3)不要用可能帶有自發(fā)熒光的固定劑，如帶有苦味酸的固定劑，還有甲醛升汞固定液，會(huì)使上皮細(xì)胞產(chǎn)生非特異性熒光；

(4)固定劑的選擇、固定時(shí)間、溫度和PH值都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

單純固定液（1）4%中性甲醛固定液：最常用的固定液，能滿足常規(guī)HE及免疫組化、PCR等工作（Job）。中性甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸緩沖液為溶劑配制的，其固定效果及對(duì)組織抗原性的保存均優(yōu)于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后應(yīng)密封并保存在陰涼處，保存時(shí)間不超過一個(gè)月。

甲醛（40%） 100ml

無(wú)水磷酸氫二鈉 6.5g

磷酸二氫鈉 4.0g

蒸餾水 900ml

(2)乙醇固定液：使用時(shí)以80%-95%的濃度為宜，具有硬化、固定、脫水等作用，對(duì)組織滲透力較弱，因此很少單獨(dú)使用，但其保存組織中的核酸強(qiáng)于中性甲醛，故常用于有核酸操作的實(shí)驗(yàn)或檢查，假如用于證實(shí)尿酸結(jié)晶和保存糖原，可用于100%乙醇固定組織。

(3)4%多聚甲醛固定液：主要用于培養(yǎng)細(xì)胞的固定。

混合固定液（1）乙醇-甲醛（乙醇-福爾馬林，AF）固定液：適用于皮下組織中肥大細(xì)胞的固定。該固定液有固定兼脫水作用，固定后的標(biāo)本可直接入95%乙醇脫水。

甲醛（40%） 100ml

95%乙醇 900ml

(2)B5（醋酸鈉-升汞-甲醛）固定液：多用于固定淋巴組織。染色前應(yīng)進(jìn)行脫汞沉淀處理。

無(wú)水醋酸鈉 1.25g升汞 6.0g蒸餾水 90ml

使用前加入甲醛 10ml

(3)Bouin固定液：非凡適用于睪丸活檢組織的固定。Bouin液對(duì)組織固定較均勻，收縮很少，不會(huì)使組織變硬變脆。需現(xiàn)配現(xiàn)用。

飽和苦味酸水溶液（約1.22%） 75ml甲醛 25ml冰醋酸 5ml(4)Carnoy固定液：穿透能力強(qiáng)，可很好的固定細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，非凡適用于固定外膜致密的組織，也適用于糖原及尼氏小體的固定。

無(wú)水乙醇 60ml氯仿 30ml冰醋酸 10ml

(5) Zenker固定液：經(jīng)此液固定的標(biāo)本，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)染色頗為清楚，但成本較高且需非凡處理汞。該固定液要避免接觸陽(yáng)光，以免引起化學(xué)變化而失效。

升汞 5.0g

重鉻酸鉀 2.5g

蒸餾水（加至） 100ml

6.組織施工的方式有哪些

答：考慮工程項(xiàng)目的施工特點(diǎn)、工藝流程、資源利用、平面或空間布置等要求，其施工可以采用依次、平行、流水等組織方式。

（1）依次施工方式具有以下特點(diǎn)： 1）沒有充分地利用工作面進(jìn)行施工，工期長(zhǎng)； 2）如果按專業(yè)成立工作隊(duì)，則各專業(yè)隊(duì)不能連續(xù)作業(yè)，有時(shí)間間歇，勞動(dòng)力及施工機(jī)具等資源無(wú)法均衡使用； 3）如果由一個(gè)工作隊(duì)完成全部施工任務(wù)，則不能實(shí)現(xiàn)專業(yè)化施工，不利于提高勞動(dòng)生產(chǎn)率和工程質(zhì)量； 4）單位時(shí)間內(nèi)投入的勞動(dòng)力、施工機(jī)具、材料等資源量較少，有利于資源供應(yīng)的組織； 5）施工現(xiàn)場(chǎng)的組織、管理比較簡(jiǎn)單。 （2）平行施工方式具有以下特點(diǎn)： 1）充分地利用工作面進(jìn)行施工，工期短； 2）如果每一個(gè)施工對(duì)象均按專業(yè)成立工作隊(duì)，則各專業(yè)隊(duì)不能連續(xù)作業(yè)，勞動(dòng)力及施工機(jī)具等資源無(wú)法均衡使用； 3）如果由一個(gè)工作隊(duì)完成一個(gè)施工對(duì)象的全部施工任務(wù)，則不能實(shí)現(xiàn)專業(yè)化施工，不利于提高勞動(dòng)生產(chǎn)率和工程質(zhì)量； 4）單位時(shí)間內(nèi)投入的勞動(dòng)力、施工機(jī)具、材料等資源量成倍地增加，不利于資源供應(yīng)的組織； 5）施工現(xiàn)場(chǎng)的組織、管理比較復(fù)雜。

（3）流水施工方式具有以下特點(diǎn)： 1）盡可能地利用工作面進(jìn)行施工，工期比較短； 2）各工作隊(duì)實(shí)現(xiàn)了專業(yè)化施工，有利于提高技術(shù)水平和勞動(dòng)生產(chǎn)率，也有利于提高工程質(zhì)量； 3）專業(yè)工作隊(duì)能夠連續(xù)施工，同時(shí)使相鄰專業(yè)隊(duì)的開工時(shí)間能夠最大限度地搭接； 4）單位時(shí)間內(nèi)投入的勞動(dòng)力、施工機(jī)具、材料等資源量較為均衡，有利于資源供應(yīng)的組織；。

7.組織部門劃分的常見方法有那些,并對(duì)每種方法進(jìn)行說明

部門劃分，亦稱為部門化，是對(duì)完成組織目標(biāo)所必須開展的各項(xiàng)活動(dòng)，按照一定的方式加以歸并組合，以形成便于管理的單位或部門。

部門劃分的基本方法有如下幾種： （1）按職能劃分部門 這是應(yīng)用最廣泛的一種部門劃分方法，幾乎可以在所有類型組織的結(jié)構(gòu)中找到它的蹤跡。任何一個(gè)企事業(yè)組織存在的目的都是要?jiǎng)?chuàng)造某種為他人所需要的物品或勞務(wù)，所以，諸如制造（創(chuàng)造或增加物品或勞務(wù)的效用）、銷售（尋找愿意按一定價(jià)格購(gòu)買物品或接受服務(wù)的顧客）、財(cái)務(wù)（資金的籌措、保管和運(yùn)作）等，可以說是所有的企事業(yè)組織的基本職能。

以這些基本職能為依據(jù)，便可以將組織劃分為生產(chǎn)部門、銷售部門、財(cái)務(wù)部門等。當(dāng)然，由于各種組織的活動(dòng)領(lǐng)域以及同一職能在不同組織中的重要程度不同等原因，現(xiàn)實(shí)中這些職能部門在不同類型的組織中會(huì)有不同的具體名稱。

按照職能劃分部門的好處是：第一，有利于確保組織的主要基本活動(dòng)得到重視；第二，由于遵循了專業(yè)化原則，有利于提高人員使用的效率，同時(shí)也簡(jiǎn)化了培訓(xùn)工作；第三，由于最高主管要對(duì)最終成果負(fù)責(zé)，從而為高層實(shí)施嚴(yán)格控制提供了手段。 這種劃分部門方式的缺點(diǎn)在于，它容易使人們過度局限于自己所在的職能部門而忽視組織整體目標(biāo)，部門間的協(xié)調(diào)比較困難；只有最高主管才能對(duì)最終成果負(fù)責(zé)，因而對(duì)各部門的績(jī)效和責(zé)任很難進(jìn)行評(píng)價(jià)，也不利于培養(yǎng)綜合全面的管理人才。

（2）按產(chǎn)品劃分部門 這是許多開展多角化經(jīng)營(yíng)的大企業(yè)經(jīng)常采用的部門劃分方式。它實(shí)際上是從按照職能劃分部門的企業(yè)中逐步發(fā)展起來的。

因?yàn)殡S著企業(yè)規(guī)模的擴(kuò)大和產(chǎn)品品種的增加，管理工作變得越來越復(fù)雜，各部門主管者的工作負(fù)擔(dān)也越來越重，而管理幅度的客觀限制又使得他們難以通過增加直接下屬的辦法來解決問題，因而，此時(shí)按照產(chǎn)品或產(chǎn)品系列來重新組織企業(yè)活動(dòng)就成為必要。在這樣的結(jié)構(gòu)安排下，組織將有關(guān)某產(chǎn)品或產(chǎn)品系列的生產(chǎn)、銷售、服務(wù)等職能活動(dòng)方面授予該產(chǎn)品分部的經(jīng)理，使他們對(duì)該產(chǎn)品經(jīng)營(yíng)的利潤(rùn)負(fù)起責(zé)任。

按照產(chǎn)品劃分部門的好處是：有利于企業(yè)采用專門設(shè)備，促進(jìn)協(xié)調(diào)，充分發(fā)揮人員的技能和專門知識(shí)，也有利于產(chǎn)品和服務(wù)的改進(jìn)和發(fā)展；能夠明確利潤(rùn)責(zé)任，便于最高主管把握各種產(chǎn)品或產(chǎn)品系列對(duì)總利潤(rùn)的貢獻(xiàn)；有利于鍛煉和培養(yǎng)獨(dú)當(dāng)一面的總經(jīng)理型的人才。 這種劃分部門方式的缺點(diǎn)主要是：它對(duì)產(chǎn)品分部主管人員的全面管理能力要求高；各產(chǎn)品分部的獨(dú)立性較強(qiáng)而整體觀念較弱；各產(chǎn)品分部?jī)?nèi)都需要保持職能部門或職能人員，從而造成資源重復(fù)配置、管理費(fèi)用增加。

（3）按地域、區(qū)域劃分部門 這是經(jīng)營(yíng)活動(dòng)在地域上比較分散的企業(yè)所常用的一種部門劃分方法。其做法是，將某一地區(qū)的業(yè)務(wù)活動(dòng)集中起來，并委派相應(yīng)的管理者，形成區(qū)域性的部門。

按照地域劃分部門，有利于鼓勵(lì)地方參與決策，促進(jìn)地區(qū)活動(dòng)的協(xié)調(diào)；有利于管理者注意當(dāng)?shù)厥袌?chǎng)的需要和問題；生產(chǎn)的當(dāng)?shù)鼗欣诮档瓦\(yùn)輸費(fèi)用，縮短交貨時(shí)間；有利于培養(yǎng)能力全面的管理者。 這種方法的主要缺點(diǎn)是，由于機(jī)構(gòu)重復(fù)，使得費(fèi)用增加，總部對(duì)地方控制的難度較大，要求管理者具有全面的管理能力。

（4）按顧客劃分部門 有許多組織按照自己所服務(wù)的顧客來劃分部門。這種方法是將與某一特定顧客有關(guān)的各種活動(dòng)結(jié)合起來，并委派相應(yīng)的管理者以形成部門。

按照顧客劃分部門的目的是為了更好的迎合特定顧客群體的要求。采用這種方法有利于重視顧客的需要，增加顧客的滿意程度，并有利于形成針對(duì)特定顧客的技能和訣竅。

不足之處主要是，按照顧客組織起來的部門常常要求特殊對(duì)待而造成部門間協(xié)調(diào)困難，管理者必須要熟悉特定顧客的情況，否則在有些情況下很難輕而易舉地對(duì)顧客進(jìn)行區(qū)分。 （5）按照技術(shù)或設(shè)備劃分部門 制造業(yè)企業(yè)中設(shè)立的焊接車間、壓力加工車間、電鍍車間，醫(yī)院的放射科、CT室等，就是按照技術(shù)或設(shè)備組織業(yè)務(wù)活動(dòng)的。

這種方法有利于充分發(fā)揮設(shè)備的能力和專業(yè)技術(shù)人員的特長(zhǎng)，便于設(shè)備維修和材料供應(yīng)。不足之處是容易強(qiáng)調(diào)局部利益而忽視整體目標(biāo)。

（6）按照時(shí)間劃分 根據(jù)時(shí)間來組織業(yè)務(wù)活動(dòng)是最古老的劃分部門的方法之一，多見于組織的底層。在許多組織中，由于經(jīng)濟(jì)的、技術(shù)的或其他一些原因，正常的工作日不能滿足要求，而必須采用輪班的做法。

例如，煉鋼爐、醫(yī)院的集中監(jiān)護(hù)室、消防隊(duì)等，均采用這種方法來進(jìn)行組織。采用這種方法有利于連續(xù)、不間斷地提供服務(wù)和進(jìn)行生產(chǎn)，有利于使設(shè)備、設(shè)施得到最充分的利用。

缺點(diǎn)在于夜間可能會(huì)缺乏監(jiān)督，人員容易疲勞，協(xié)調(diào)和溝通有時(shí)會(huì)比較困難。 （7）按照人數(shù)劃分 單純地按照人數(shù)來安排業(yè)務(wù)活動(dòng)是一種最原始、最簡(jiǎn)單的劃分部門的方法。

當(dāng)最終成果只是取決于總?cè)藬?shù)時(shí)，或者說每個(gè)人的貢獻(xiàn)都是單純無(wú)差別的簡(jiǎn)單勞動(dòng)時(shí)，采用這種方法是有效的。

8.組織措施包括哪些

保證安全的組織措施和技術(shù)措施一、保證安全的組織措施一般包括：工作票制度、工作許可制度、工作監(jiān)護(hù)制度、工作間斷、轉(zhuǎn)移和終結(jié)以及恢復(fù)送電制度。

1、工作票制度工作票是準(zhǔn)許在電氣設(shè)備，熱力和機(jī)械設(shè)備以及電力線路上工作的書面命令書。（1）發(fā)電廠（變電站）第一種工作票；在發(fā)電廠或變電所高壓電氣設(shè)備上工作，需要全部或部分停電；在高壓室內(nèi)的二次接線和照明等回線上的工作，需要將高壓設(shè)備停電或做安全措施的工作。

（2）發(fā)電廠（變電站）第二種工作票；在發(fā)電廠或變電所的電氣設(shè)備上帶電作業(yè)和在帶電設(shè)備外殼上的工作，在控制盤和低壓配電盤、配電箱、電源干線上的工作；二次接線回路上工作而無(wú)需將高壓設(shè)備停電；轉(zhuǎn)動(dòng)中的發(fā)電機(jī)，同期調(diào)相機(jī)的勵(lì)磁回路或高壓電動(dòng)機(jī)轉(zhuǎn)子電阻回路上的工作；非當(dāng)班值班人員用絕緣棒和電壓互感器定相或用鉗型電流表測(cè)量高壓回路的電流。（3）電力線路第一種工作票；在停電線路（或在雙回線路中的一回停電線路）上的工作；在全部或部分停電的配電變壓器高架上或配電變壓器室內(nèi)的工作。

（4）電力線路第二種工作票；在電力線路上帶電作業(yè)；在帶電線路桿塔上工作；在運(yùn)行中的配電變壓器臺(tái)上或配電變壓器室內(nèi)的工作。（5）熱力機(jī)械工作票；（6）一級(jí)動(dòng)火票；（7）二級(jí)動(dòng)火票。

工作票所涉及人員：（1）工作票簽發(fā)人；（2）工作負(fù)責(zé)人（監(jiān)護(hù)人）；（3）工作許可人；（4）工作班成員。2、工作許可制度工作許可制度，是在完成安全措施之后，為進(jìn)一步加強(qiáng)。