常用的生物量測(cè)定方法(測(cè)定微生物的生物量主要方法)
1.測(cè)定微生物的生物量有哪些主要方法
測(cè)定微生物的生物量有哪些主要方法
?測(cè)定的方法主要有四種：
1.直接計(jì)數(shù)測(cè)定：根據(jù)微生物種類，有血球計(jì)數(shù)板和細(xì)菌計(jì)數(shù)板；
2.比濁法：根據(jù)菌懸液的濃度在一定范圍內(nèi)與光密度成正比，可以用分光光度計(jì)測(cè)OD值，用OD值表示樣品菌液濃度；
3.核酸計(jì)數(shù)法：熒光定量PCR技術(shù)；
4.活菌計(jì)數(shù)法：MPN和平板計(jì)數(shù)法由于測(cè)定方法的限制。新鮮土樣經(jīng)氯仿熏蒸后（24h），土壤微生物死亡細(xì)胞發(fā)生裂解，釋放出微生物生物量碳，用一定體積的LK2SO4溶液提取土壤，借用有機(jī)碳自動(dòng)分析儀測(cè)定微生物生物量碳含量。根據(jù)熏蒸土壤與未熏蒸土壤測(cè)定有機(jī)碳的差值及轉(zhuǎn)換系數(shù)（KEC），從而計(jì)算土壤微生物生物量碳。
2.常用的測(cè)定做生物生長(zhǎng)的方法有哪幾種
常用測(cè)定微生物生長(zhǎng)的方法有：
1）稱干重法.可用離心法或過濾法測(cè)定.優(yōu)點(diǎn)：可適用于一切微生物，缺點(diǎn)：無法區(qū)別死菌和活菌.
2）比濁法.原理：由于微生物在液體培養(yǎng)時(shí)，原生質(zhì)的增加導(dǎo)致混濁度的增加，可用分光光度計(jì)測(cè)定.優(yōu)點(diǎn)：比較準(zhǔn)確.
3）測(cè)含氮量，大多數(shù)微生物的含氮量占干重的比例較一致，根據(jù)含氮量再乘以6.25即可測(cè)得其粗蛋白的含量.
4）血球計(jì)數(shù)板法.優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便、快速、直觀.缺點(diǎn)：結(jié)果包括死菌和活菌.
5）液體稀釋法.對(duì)未知菌樣作連續(xù)的10倍系列稀釋，經(jīng)培養(yǎng)后，記錄每個(gè)稀釋度出現(xiàn)生長(zhǎng)的試管數(shù)，然后查MPN表，再根據(jù)樣品的稀釋倍數(shù)就可計(jì)算其中的活菌含量.優(yōu)點(diǎn)：可計(jì)算活菌數(shù)，較準(zhǔn)確.缺點(diǎn)：比較繁瑣.
6）平板菌落計(jì)數(shù)法.取一定體積的稀釋菌液涂布在合適的固體培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)后計(jì)算原菌液的含菌數(shù).優(yōu)點(diǎn)，可以獲得活菌的信息.缺點(diǎn)：操作繁瑣，需要培養(yǎng)一定時(shí)間才能獲得，測(cè)定結(jié)果受多種因素的影響.
3.1.測(cè)定微生物數(shù)量的方法有哪些
細(xì)菌計(jì)數(shù)1.計(jì)數(shù)器測(cè)定法：
即用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。取一定體積的樣品細(xì)胞懸液置于血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)室內(nèi)，用顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。由于計(jì)數(shù)室的容積是一定的（O.1mm3），因而根據(jù)計(jì)數(shù)器刻度內(nèi)的細(xì)菌數(shù)，可計(jì)算樣品中的含菌數(shù)。本法簡(jiǎn)便易行，可立即得出結(jié)果。
本法不僅適于細(xì)菌計(jì)數(shù)，也適用于酵母菌及霉菌孢子計(jì)數(shù)。
2、電子計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)法：
電子計(jì)數(shù)器的工作原理是測(cè)定小孔中液體的電阻變化，小孔僅能通過一個(gè)細(xì)胞，當(dāng)一個(gè)細(xì)胞通過這個(gè)小孔時(shí)，電阻明顯增加，形成一個(gè)脈沖，自動(dòng)記錄在電子記錄裝置上。
該法測(cè)定結(jié)果較準(zhǔn)確，但它只識(shí)別顆粒大小，而不能區(qū)分是否為細(xì)菌。因此，要求菌懸液中不含任何碎片。
3、活細(xì)胞計(jì)數(shù)法
常用的有平板菌落計(jì)數(shù)法，是根據(jù)每個(gè)活的細(xì)菌能長(zhǎng)出一個(gè)菌落的原理設(shè)計(jì)的。取一定容量的菌懸液，作一系列的倍比稀釋，然后將定量的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)出的菌落數(shù)，可算出培養(yǎng)物中的活菌數(shù)。此法靈敏度高，是一種檢測(cè)污染活菌數(shù)的方法，也是目前國(guó)際上許多國(guó)家所采用的方法。使用該法應(yīng)注意：①一般選取菌落數(shù)在30~300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，過多或過少均不準(zhǔn)確；②為了防止菌落蔓延，影響計(jì)數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入O.001%2,3,5一氯化三苯基四氮唑（TTC）；③本法限用于形成菌落的微生物。
廣泛應(yīng)用于水、牛奶、食物、藥品等各種材料的細(xì)菌檢驗(yàn)，是最常用的活菌計(jì)數(shù)法。
4、比濁法
比濁法是根據(jù)菌懸液的透光量間接地測(cè)定細(xì)菌的數(shù)量。細(xì)菌懸浮液的濃度在一定范圍內(nèi)與透光度成反比，與光密度成正比，所以，可用光電比色計(jì)測(cè)定菌液，用光密度（OD值）表示樣品菌液濃度。
此法簡(jiǎn)便快捷，但只能檢測(cè)含有大量細(xì)菌的懸浮液，得出相對(duì)的細(xì)菌數(shù)目，對(duì)顏色太深的樣品，不能用此法測(cè)定。
5、測(cè)定細(xì)胞重量法
此法分為濕重法和干重法。濕重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后將濕菌體進(jìn)行稱重；干重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后，以清水洗凈放人干燥器加熱烘干，使之失去水分然后稱重。
此法適于菌體濃度較高的樣品，是測(cè)定絲狀真菌生長(zhǎng)量的一種常用方法。
6、測(cè)定細(xì)胞總氮量或總碳量
氮、碳是細(xì)胞的主要成分，含量較穩(wěn)定，測(cè)定氮、碳的含量可以推知細(xì)胞的質(zhì)量。此法適于細(xì)胞濃度較高的樣品。
7、顏色改變單位法（colour change unit，簡(jiǎn)稱CCU）
這種方法通常用于很小，用一般的比濁法無法計(jì)數(shù)的微生物，比如支原體等，因?yàn)橹гw的液體培養(yǎng)物是完全透明的，呈現(xiàn)為清亮透明紅色，因此無法用比濁法來計(jì)數(shù)，由于支原體固體培養(yǎng)很困難，用cfu法也不容易計(jì)數(shù)，因此需要用特殊的計(jì)數(shù)方法，即CCU法。它是以微生物在培養(yǎng)基中的代謝活力為指標(biāo)，來計(jì)數(shù)微生物的相對(duì)含量的，下面以解脲脲原體為例單介紹其操作：，簡(jiǎn)
(1)取12只無菌試管，每一管裝1.8ml解脲脲原體培養(yǎng)基。
(2)在第一管加入0.2ml待測(cè)解脲脲原體菌液，充分混勻，從中吸取0.2ml加入第二管，依次類推，10倍梯度稀釋，一直到最末一管
(3)于37度培養(yǎng)，以培養(yǎng)基顏色改變的最末一管作為待測(cè)菌液的CCU，也就是支原體的最大代謝活力，比如第六管出現(xiàn)顏色改變，他的相對(duì)濃度就是10的6次方CCU/ml.
一般來說，比濁法和菌落計(jì)數(shù)法就可以滿足絕大多數(shù)細(xì)菌的計(jì)數(shù)，但是對(duì)支原體這樣比較特殊的微生物，用CCU法比較合適。
4.高中生物常用的實(shí)驗(yàn)方法有哪些
1.實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)方法是整個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的精髓，是做好實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的關(guān)鍵所在.現(xiàn)將與中學(xué)實(shí)驗(yàn)有關(guān)的一些最常見的經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)方法匯總?cè)缦拢海?）化學(xué)物質(zhì)的檢測(cè)方法：①淀粉——碘液 ②還原糖——斐林試劑、班氏試劑 ③CO2——Ca(OH)2溶液或酸堿指示劑 ④乳酸——pH試紙 ⑤O2——余燼復(fù)燃 ⑥無O2——火焰熄滅 ⑦蛋白質(zhì)——雙縮脲試劑 ⑧染色體——龍膽紫、醋酸洋紅溶液 ⑨DNA——二苯胺試劑 ⑩脂肪——蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ染液（2）實(shí)驗(yàn)結(jié)果的顯示方法：①光合速率——O2釋放量或CO2吸收量或淀粉產(chǎn)生量 ②呼吸速率——O2吸收量或CO2釋放量或淀粉減少量 ③原子途徑——放射性同位素示蹤法 ④細(xì)胞液濃度大小——質(zhì)壁分離 ⑤細(xì)胞是否死亡——質(zhì)壁分離 ⑥甲狀腺激素作用——?jiǎng)游锖难趿?，發(fā)育速度等 ⑦生長(zhǎng)激素作用——生長(zhǎng)速度（體重變化，身高變化） ⑧胰島素作用——?jiǎng)游锘顒?dòng)狀態(tài) ⑨菌量——菌落數(shù)或亞甲基藍(lán)溶液褪色程度 ⑩大腸桿菌——伊紅—美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（3）實(shí)驗(yàn)條件的控制方法：①增加水中氧氣——泵入空氣或吹氣或放入綠色植物 ②減少水中氧氣——容器密封或油膜覆蓋或用涼開水 ③除去容器中CO2——NaOH溶液 ④除去葉片中原有淀粉——置于黑暗環(huán)境 ⑤除去葉片中葉綠素——酒精隔水加熱 ⑥除去光合作用對(duì)呼吸作用的干擾——給植株遮光 ⑦如何得到單色光——棱鏡色散或彩色薄膜濾光 ⑧血液抗凝——加入檸檬酸鈉 ⑨線粒體提取——細(xì)胞勻漿離心 ⑩骨的脫鈣——鹽酸溶液 ⑾滅菌方法——微生物培養(yǎng)的關(guān)鍵在于滅菌，對(duì)不同材料，滅菌方法不同：培養(yǎng)基用高壓蒸氣滅菌；接種環(huán)用火焰灼燒滅菌；雙手用肥皂洗凈，擦干后用75%酒精消毒；整個(gè)接種過程都在實(shí)驗(yàn)室無菌區(qū)進(jìn)行.（4）實(shí)驗(yàn)中控制溫度的方法：①還原糖鑒定：水浴煮沸加熱 ②酶促反應(yīng)：水浴保溫 ③用酒精溶解葉中的葉綠素：酒精要隔水加熱 ④DNA的鑒定：水浴煮沸加熱 ⑤細(xì)胞和組織培養(yǎng)以及微生物培養(yǎng)：恒溫培養(yǎng)2.斐林試劑、班氏試劑與尿糖試紙 這三種物質(zhì)均可用來檢驗(yàn)含醛基的有機(jī)物的存在，在醫(yī)學(xué)上用來檢驗(yàn)糖尿病，其原理均是利用了Cu2+的氧化性把醛基氧化，但成分略有不同：斐林試劑：即硫酸銅、氫氧化鈉和酒石酸鉀鈉組成的藍(lán)色混合溶液.分為斐林試劑A和斐林試劑B,A為CuSO4溶液，B為氫氧化鈉和酒石酸鉀鈉的混合溶液，使用時(shí)將A、B等體積混合即成斐林試劑.班氏試劑：即硫酸銅、碳酸鈉和檸檬酸鈉組成的混合液，又叫本尼迪克特（Benedict）試劑，它與醛反應(yīng)的結(jié)果是與斐林試劑一致的，只是比斐林試劑更穩(wěn)定，所以在臨床化驗(yàn)中更常使用.尿糖試紙：又叫硫酸銅試紙，呈白色，帶藍(lán)色斑點(diǎn)，用于糖尿病患者的尿糖測(cè)試.每片含硫酸銅20毫克，枸櫞酸300毫克，碳酸鈉80毫克，氫氧化鈉235毫克.尿糖試紙法快速、方便，試紙的正確使用方法為：將試紙條放在尿液中浸濕，一秒鐘后取出，在一分鐘內(nèi)觀察試紙的顏色，并與標(biāo)準(zhǔn)色板對(duì)照，根據(jù)不同的顏色來確定尿糖陽性的程度.3.斐林試劑和雙縮脲試劑的比較 相同點(diǎn)：①都由NaOH溶液和CuSO4溶液構(gòu)成；②斐林試劑甲液和雙縮脲試劑A都為0.1g/mLNaOH溶液.不同點(diǎn)：①CuSO4溶液濃度不一樣：斐林試劑乙液為0.05g/mLCuSO4溶液，雙縮脲試劑B為0.01g/mLCuSO4溶液.②配制比例不一樣.③使用方法不一樣：斐林試劑是甲、乙液一起混合后再使用，雙縮脲試劑則是先向待鑒定材料加入A試劑搖勻后，再加入試劑B.④鑒定的對(duì)象不一樣：斐林試劑鑒定的是還原糖，雙縮脲試劑鑒定的是蛋白質(zhì).⑤反應(yīng)本質(zhì)及顏色反應(yīng)不一樣.4.蘇丹Ⅲ染液與蘇丹Ⅳ染液的比較 都是用來鑒定脂肪.蘇丹Ⅳ染液更易溶于脂肪，所以染色更深，同時(shí)要求染色時(shí)間更短.生物學(xué)中常用的試劑：1、斐林試劑： 成分：0.1g/ml NaOH（甲液）和0.05g/ml CuSO4（乙液）.用法：將斐林試劑甲液和乙液等體積混合，再將混合后的斐林試劑倒入待測(cè)液，水浴加熱或直接加熱，如待測(cè)液中存在還原糖，則呈磚紅色.2、班氏糖定性試劑：為藍(lán)色溶液.和葡萄糖混合后沸水浴會(huì)出現(xiàn)磚紅色沉淀.用于尿糖的測(cè)定.3、雙縮脲試劑：成分：0.1g/ml NaOH（甲液）和0.01g/ml CuSO4（乙液）.用法：向待測(cè)液中先加入2ml甲液，搖勻，再向其中加入3~4滴乙液，搖勻.如待測(cè)中存在蛋白質(zhì)，則呈現(xiàn)紫色.4、蘇丹Ⅲ：用法：取蘇丹Ⅲ顆粒溶于95%的酒精中，搖勻.用于檢測(cè)脂肪.可將脂肪染成橘黃色（被蘇丹Ⅳ染成紅色）.5、二苯胺：用于鑒定DNA.DNA遇二苯胺（沸水?。?huì)被染成藍(lán)色.6、甲基綠：用于鑒定DNA.DNA遇甲基綠（常溫）會(huì)被染成藍(lán)綠色.（甲基綠使DNA呈現(xiàn)綠色，吡羅紅使RNA呈現(xiàn)紅色.）7、50%的酒精溶液：在脂肪鑒定中，用蘇丹Ⅲ染液染色，再用50%的酒精溶液洗去浮色.8、75%的酒精溶液：用于殺菌消毒，75%的酒精能滲入細(xì)胞內(nèi)，使蛋白質(zhì)凝固變性.低于這個(gè)濃度，酒精的滲透脫水作用減弱，殺菌力不強(qiáng)；而高于這個(gè)濃度，則會(huì)使細(xì)菌表面蛋白質(zhì)迅速脫水，凝固成膜，妨礙酒精透入，削弱殺菌能力.75%的酒精溶液常用于手術(shù)前、打針、換藥、針灸前皮膚脫碘消毒以及機(jī)械消毒等.9、95%的酒精溶液：冷卻的體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精可用于凝集DNA.10、。
5.測(cè)定微生物數(shù)量的方法
現(xiàn)在用的多的就是這幾種，樓主挑著看吧
細(xì)菌計(jì)數(shù)1.計(jì)數(shù)器測(cè)定法：
即用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。取一定體積的樣品細(xì)胞懸液置于血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)室內(nèi)，用顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。由于計(jì)數(shù)室的容積是一定的（O.1mm3），因而根據(jù)計(jì)數(shù)器刻度內(nèi)的細(xì)菌數(shù)，可計(jì)算樣品中的含菌數(shù)。本法簡(jiǎn)便易行，可立即得出結(jié)果。
本法不僅適于細(xì)菌計(jì)數(shù)，也適用于酵母菌及霉菌孢子計(jì)數(shù)。
2、電子計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)法：
電子計(jì)數(shù)器的工作原理是測(cè)定小孔中液體的電阻變化，小孔僅能通過一個(gè)細(xì)胞，當(dāng)一個(gè)細(xì)胞通過這個(gè)小孔時(shí)，電阻明顯增加，形成一個(gè)脈沖，自動(dòng)記錄在電子記錄裝置上。
該法測(cè)定結(jié)果較準(zhǔn)確，但它只識(shí)別顆粒大小，而不能區(qū)分是否為細(xì)菌。因此，要求菌懸液中不含任何碎片。
3、活細(xì)胞計(jì)數(shù)法
常用的有平板菌落計(jì)數(shù)法，是根據(jù)每個(gè)活的細(xì)菌能長(zhǎng)出一個(gè)菌落的原理設(shè)計(jì)的。取一定容量的菌懸液，作一系列的倍比稀釋，然后將定量的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)出的菌落數(shù)，可算出培養(yǎng)物中的活菌數(shù)。此法靈敏度高，是一種檢測(cè)污染活菌數(shù)的方法，也是目前國(guó)際上許多國(guó)家所采用的方法。使用該法應(yīng)注意：①一般選取菌落數(shù)在30~300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，過多或過少均不準(zhǔn)確；②為了防止菌落蔓延，影響計(jì)數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入O.001%2,3,5一氯化三苯基四氮唑（TTC）；③本法限用于形成菌落的微生物。
廣泛應(yīng)用于水、牛奶、食物、藥品等各種材料的細(xì)菌檢驗(yàn)，是最常用的活菌計(jì)數(shù)法。
4、比濁法
比濁法是根據(jù)菌懸液的透光量間接地測(cè)定細(xì)菌的數(shù)量。細(xì)菌懸浮液的濃度在一定范圍內(nèi)與透光度成反比，與光密度成正比，所以，可用光電比色計(jì)測(cè)定菌液，用光密度（OD值）表示樣品菌液濃度。
此法簡(jiǎn)便快捷，但只能檢測(cè)含有大量細(xì)菌的懸浮液，得出相對(duì)的細(xì)菌數(shù)目，對(duì)顏色太深的樣品，不能用此法測(cè)定。
5、測(cè)定細(xì)胞重量法
此法分為濕重法和干重法。濕重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后將濕菌體進(jìn)行稱重；干重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后，以清水洗凈放人干燥器加熱烘干，使之失去水分然后稱重。
此法適于菌體濃度較高的樣品，是測(cè)定絲狀真菌生長(zhǎng)量的一種常用方法。
6、測(cè)定細(xì)胞總氮量或總碳量
氮、碳是細(xì)胞的主要成分，含量較穩(wěn)定，測(cè)定氮、碳的含量可以推知細(xì)胞的質(zhì)量。此法適于細(xì)胞濃度較高的樣品。
7、顏色改變單位法（colour change unit，簡(jiǎn)稱CCU）
這種方法通常用于很小，用一般的比濁法無法計(jì)數(shù)的微生物，比如支原體等，因?yàn)橹гw的液體培養(yǎng)物是完全透明的，呈現(xiàn)為清亮透明紅色，因此無法用比濁法來計(jì)數(shù)，由于支原體固體培養(yǎng)很困難，用cfu法也不容易計(jì)數(shù)，因此需要用特殊的計(jì)數(shù)方法，即CCU法。它是以微生物在培養(yǎng)基中的代謝活力為指標(biāo)，來計(jì)數(shù)微生物的相對(duì)含量的，下面以解脲脲原體為例單介紹其操作：，簡(jiǎn)
(1)取12只無菌試管，每一管裝1.8ml解脲脲原體培養(yǎng)基。
(2)在第一管加入0.2ml待測(cè)解脲脲原體菌液，充分混勻，從中吸取0.2ml加入第二管，依次類推，10倍梯度稀釋，一直到最末一管
(3)于37度培養(yǎng)，以培養(yǎng)基顏色改變的最末一管作為待測(cè)菌液的CCU，也就是支原體的最大代謝活力，比如第六管出現(xiàn)顏色改變，他的相對(duì)濃度就是10的6次方CCU/ml.
一般來說，比濁法和菌落計(jì)數(shù)法就可以滿足絕大多數(shù)細(xì)菌的計(jì)數(shù)，但是對(duì)支原體這樣比較特殊的微生物，用CCU法比較合適。
6.測(cè)定微生物生長(zhǎng)量的方法有幾種
v常用測(cè)定微生物生長(zhǎng)的方法有：1）稱干重法。
可用離心法或過濾法測(cè)定。優(yōu)點(diǎn)：可適用于一切微生物，缺點(diǎn)：無法區(qū)別死菌和活菌。
2）比濁法。原理：由于微生物在液體培養(yǎng)時(shí)，原生質(zhì)的增加導(dǎo)致混濁度的增加，可用分光光度計(jì)測(cè)定。
優(yōu)點(diǎn)：比較準(zhǔn)確。3）測(cè)含氮量，大多數(shù)微生物的含氮量占干重的比例較一致，根據(jù)含氮量再乘以6.25即可測(cè)得其粗蛋白的含量。
4）血球計(jì)數(shù)板法。優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便、快速、直觀。
缺點(diǎn)：結(jié)果包括死菌和活菌。5）液體稀釋法。
對(duì)未知菌樣作連續(xù)的10倍系列稀釋，經(jīng)培養(yǎng)后，記錄每個(gè)稀釋度出現(xiàn)生長(zhǎng)的試管數(shù)，然后查MPN表，再根據(jù)樣品的稀釋倍數(shù)就可計(jì)算其中的活菌含量。優(yōu)點(diǎn)：可計(jì)算活菌數(shù)，較準(zhǔn)確。
缺點(diǎn)：比較繁瑣。6）平板菌落計(jì)數(shù)法。
取一定體積的稀釋菌液涂布在合適的固體培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)后計(jì)算原菌液的含菌數(shù)。優(yōu)點(diǎn)，可以獲得活菌的信息。
缺點(diǎn)：操作繁瑣，需要培養(yǎng)一定時(shí)間才能獲得，測(cè)定結(jié)果受多種因素的影響。
